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網(wǎng)站首頁 ◇ 技術(shù)支持 ◇ 尿液中對硝基酚的檢測——HPLC法
對硝基酚是接觸硝基苯及含對硝基苯基化合物作業(yè)工人體內(nèi)的主要代謝產(chǎn)物。尿中對硝基酚濃度的測定，被認為是生物學(xué)監(jiān)測和職業(yè)病診斷的重要指標(biāo)。尿中對硝基酚的測定方法有比色法、氣相色譜法及液相色譜法等。比色法操作煩瑣、靈敏度差；氣相色譜法雖然靈敏度高、選擇性好，但是需要將對硝基酚衍生、操作復(fù)雜、不適于大批樣品分析；近年來開展環(huán)境樣品和尿液樣品中對硝基酚檢測主要使用HPLC方法，但是由于尿液中雜質(zhì)干擾多，導(dǎo)致凈化不好，干擾多，需要增加凈化步驟。
方法優(yōu)勢：
迪馬科技開發(fā)的《尿液中對硝基酚的檢測》，采用固相萃取-液相色譜法測定人尿中的對硝基酚，以濃鹽酸作為提取液，采用ProElut PXL 和ProElut Al-N固相萃取柱凈化樣品，通過HPLC檢測；方法定量限是0.1 mg/kg。本方案前處理步驟簡單、凈化效果好，基質(zhì)效應(yīng)小且檢測時間短；準(zhǔn)確度高，重現(xiàn)性好。
以下為詳細解決方案，敬請參考！
尿液中對硝基酚的檢測——HPLC法
1、適用范圍
本方案適用于尿液中對硝基酚的檢測，本方法定量限0.1 mg/kg。
2、提取
取10 g樣品，加入2 mL濃鹽酸，沸水浴60 min，冷卻至室溫；
加入25 mL乙酸乙酯振蕩2 min，6000 rpm離心2 min；
取出上清液在40 ℃水浴條件下，減壓蒸至近干，再加入3 mL 50%甲醇水混勻，待凈化。
3、凈化—— ProElut Al-N 1 g/6 mL （Cat#：65306）上層
ProElut PXL 3 mL（Cat#：65920）下層
a活 化： | 加入5 mL甲醇、5 mL 50%甲醇水，流出液棄去； |
b上 樣： | 將待凈化液加入小柱，流出液棄去； |
c淋 洗： | 加入5 mL 50%甲醇水淋洗小柱，流出液棄去，棄去上層小柱，再用3 mL 50%甲醇水淋洗下層小柱，流出液棄去； |
d洗 脫： | 加入3 mL甲醇，收集洗脫液； |
e重新溶解： | 將洗脫液在40 ℃下減壓蒸至近干，1 mL水溶解殘渣，過微孔濾膜供HPLC分析。 |
4、色譜條件
色譜柱：Diamonsil C18（2），250 mm × 4.6 mm，5 μm（Cat#：99603）
流 速：1.0 mL/min 進樣量：20 μL 柱 溫：30 ℃
檢測器：UV 360 nm
流動相： A：0.1%甲酸水 B：甲醇 A：B=60：40
5、添加回收結(jié)果
人尿中對硝基酚的HPLC檢測添加回收結(jié)果
分析物 | 添加水平(mg/kg) | 回收率(%) |
對硝基酚 | 0.1 | 82.30 |
0.5 | 81.69 |
對硝基酚標(biāo)準(zhǔn)品(1.0 mg/L)液相色譜圖
對硝基酚標(biāo)準(zhǔn)品(5.0 mg/L)液相色譜圖
添加水平為0.1 mg/kg人尿中對硝基酚檢測的液相色譜圖
添加水平為0.5 mg/kg人尿中對硝基酚檢測的液相色譜圖
人尿中對硝基酚檢測(空白樣品)的液相色譜圖
尿液中對硝基酚的檢測——HPLC法相關(guān)產(chǎn)品信息：
貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
樣品前處理 | ||
65306 | ProElut AL-N | 1 g/6 mL 30/pk |
65920 | ProElut PXL | 3mL 50/pk |
244358 | 12管防交叉污染真空SPE萃取裝置 | 12位 |
4803 | 1,3,6mL柱管通用連接器 | 15/pk |
4806 | 考克(控制流量) | 15/pk |
99011 | 真空/正壓兩用泵，無油 | 1/pk |
99013 | 抽濾瓶套裝 (包括硅橡膠管2米,2L抽濾瓶及橡膠塞) | 1/pk |
30039 | FitMax針頭式過濾器 Nylon | 13 mm,0.22 μm 100/pk |
30040 | FitMax針頭式過濾器 Nylon | 13 mm,0.45 μm 100/pk |
標(biāo)準(zhǔn)品 | ||
12-N-10855-5G | 對硝基酚[100-02-7] | 5 g |
色譜柱及保護柱 | ||
99603 | Diamonsil C18(2) 通用型反相色譜柱 | 250 × 4.6 mm，5 μm |
6201 | EasyGuard C18 保護柱 | 10 × 4.0 mm 1/pk 2個柱芯+1個柱套 |
HPLC溶劑?緩沖鹽?離子對試劑 | ||
50102 | 甲醇 HPLC級 | 4 L |
50104 | 乙酸乙酯 HPLC級 | 4 L |
50144 | 甲酸 HPLC級 | 50 mL |
通用色譜產(chǎn)品 | ||
52401B | 瓶架/藍色（現(xiàn)貨） | 50孔 |
52401A | 瓶架/白色（現(xiàn)貨） | 50孔 |
1034 | 樣品瓶（棕色/螺紋） | 2 mL, 100/pk |
1035 | 樣品瓶蓋/含墊（已經(jīng)組裝） | 100/pk |
H80465 | HPLC 進樣針 | 25 μL |
紅色產(chǎn)品貨號#30039、#30040、#1034、#1035*
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